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?ApoH捕獲BAC試劑盒-數(shù)據(jù)表
發(fā)布時間： 2025-06-13 點擊次數(shù)： 1154次ApoH捕獲BAC試劑盒
ApoH捕獲BAC試劑盒
描述：
ApoHCaptoBAC試劑盒在大多數(shù)樣本中進行細菌捕獲。它包括涂有ApoH的磁珠和一種特別開發(fā)的緩沖液，以確保最佳的細菌捕獲。
樣品按照試劑盒說明在緩沖液中稀釋后加入磁珠。短暫振蕩后，將上清液移除，磁鐵（未提供）固定磁珠以保持其在底部。然后細菌在磁珠上濃縮，并且沒有潛在的抑制劑?？梢允褂贸Ｒ?guī)檢測方法進行分析。
該產(chǎn)品的保質期為2年，需在28°C保存。該產(chǎn)品有兩種測試格式，分別為25或50。
參考編號：MP1001150T
數(shù)量：50個測試
價格：839 €（不含稅）
成分：
1 mL ApoH 磁珠 (參考編號: MP200011ML)
50毫升緩沖液TTGB 10X（編號：TP1000450ML）
ApoHCaptoBAC 試劑盒
參考文獻：MP10011
僅供研究使用
28°C
參考文獻
有效期
儲存溫度范圍：28°C
批號
參考編號
ApOHO
提升靈敏度，改進診斷水平
一、簡介
ApoH 是一種血漿蛋白，能夠結合包括病毒（12）、真菌（3）和細菌（46）在內的微生物。ApoH 蛋白也被稱為載脂蛋白 H 或β2 糖蛋白 1。其多特異性特點使得多種微生物的多重檢測成為可能。這種親和捕獲方法操作簡單、溫和且快速，能夠讓微生物保持活性和感染性。捕獲的微生物被濃縮并與潛在抑制劑分離，從而更易于通過常用的特異性技術進行鑒定/檢測，進而提高了檢測靈敏度（710）。
這些特性使得 ApoHCaptoBAC 試劑盒成為一種創(chuàng)新的樣本預處理工具，可用于細菌分離前的操作，以便進行靈敏的鑒定/檢測。
二、原理
在 ApoHCaptoBAC 試劑盒中，ApoH 與磁珠結合。該試劑盒配備了一種特殊的結合緩沖液，可增強 ApoH 對細菌的親和力。將 ApoH 磁珠添加到任何復雜的生物介質中，并在提供的緩沖液中進行稀釋。初始樣本及其潛在抑制劑可以被去除，而通過 ApoH 與磁珠連接的捕獲細菌則利用磁鐵保留在試管中。然后，細菌即可用于通過分子技術（如 PCR）、免疫檢測（如 ELISA、WB）或在適當培養(yǎng)基中培養(yǎng)等方法進行鑒定/檢測。
三、試劑
參考文獻 MP20001 ApoH 磁珠
ApoH 包被磁珠懸浮液中，每毫升含有\(10^\)個直徑約為 200 nm 的磁珠，懸浮在含有\(<0.02\%\)疊化鈉的緩沖液中。
參考文獻 TP10004 10X TTGB 緩沖液
10X TTGB 緩沖液是一種淺黃色水性結合緩沖液，經(jīng) 0.2 µm 過濾且為 10 倍濃縮液。按以下說明進行稀釋。
注意：試劑盒中包含的所有試劑均可單獨購買。
四、儲存
所有試劑在室溫下運輸時功能不受影響，收到后請儲存于 28°C。
所有試劑在 28°C 下可保持穩(wěn)定直至有效期。
ApoH 磁珠小瓶應直立存放，以確保磁珠始終處于儲存溶液中。
使用后，所有試劑應迅速儲存于 28°C。
五、所需材料（未提供）
無菌蒸餾水。
合適的微量移液器和無菌過濾吸頭。
合適的反應管，玻璃或塑料材質（僅限聚丙烯，避免使用聚苯乙烯）。
孵育過程中用于樣本攪拌的合適設備。
可調節(jié)至適當溫度的培養(yǎng)箱。
層流柜或針對目標微生物類型所需的特定微生物環(huán)境。
與試管兼容的側向吸引專用磁性裝置；請注意，不同市售磁鐵的吸引效率和速度有所不同。
用于揭示目標微生物所需的材料和試劑。
六、安全與注意事項
為了更好地保持穩(wěn)定性，所有試劑的處理必須小心，避免任何污染。
是否需要無菌工作區(qū)域將取決于捕獲微生物的用途（培養(yǎng)時為必需）。
ApoH 磁珠儲存緩沖液中含有\(<0.02\%\)的疊化鈉。疊化鈉的痕量不會干擾捕獲過程，也不會影響微生物的活性：使用前無需洗滌磁珠。疊化鈉可能與銅或鉛管道發(fā)生反應，形成爆炸性金屬疊氮化物。通過管道處理時，需用大量水沖洗，以防止疊氮化物積聚。
ApoH 是一種源自人類的蛋白質。盡管這種蛋白質是從血漿或血清中純化而來，并且在采集時根據(jù)歐洲法規(guī)不含感染性因子（HIV、HBV、HCV），但仍建議將 ApoH 磁珠作為潛在感染性產(chǎn)品進行處理。
試劑和標本的處理應符合良好的實驗室規(guī)范。未使用的試劑、樣本和廢物的處理應符合當?shù)胤ㄒ?guī)。
請勿使用過期試劑。
七、重要說明
本方案旨在為最多 5 mL 樣本中的細菌結合提供一般指導。根據(jù)細菌菌株、樣本性質和體積，可能需要進一步優(yōu)化以實現(xiàn)最佳結合能力。ApoH 捕獲的機制不同于常規(guī)的抗原抗體相互作用。為確保您的實驗取得更好的成功，請聯(lián)系我們的技術支持
在細菌捕獲之前，ApoH 磁珠不得渦旋、冷凍、干燥、在高溫（>60°C）或極 pH（>9 或 <5）條件下處理。如果需要保留有活力的微生物，捕獲后也應采取同樣的注意事項。
僅在懷疑微生物負載較高時增加磁珠體積。磁珠能夠結合大量微生物：1 µL 磁珠可從純培養(yǎng)物中結合\(1×10^\)個大腸桿菌。
八、樣本采集與處理
我們目前的數(shù)據(jù)表明，ApoH 磁珠可以捕獲各種固體（懸浮后）或液體樣本中的細菌。
將固體樣本（如肉類、組織）在稀釋至 1X 的捕獲緩沖液中研磨。然后在添加磁珠之前，用無菌紗布過濾混合物，否則磁珠可能會被樣本碎片卡住，無法被磁化。
優(yōu)先使用新鮮樣本，避免混合樣本?；旌系难?、混合的血清或混合的血漿可能會形成凝塊，能夠捕獲和聚集磁珠，從而使磁珠無法用于結合微生物。
在細菌添加的情況下，使用臨床菌株而非“標準"細菌（如 ATCC 菌株 = 美國典型培養(yǎng)物保藏中心菌株）。實際上，許多標準細菌會失去對 ApoH 蛋白或 ApoH 衍生的 Peps6 分子的吸引力。
使用全血時，選擇 EDTA 抗凝劑。
所有稀釋或處理后的樣本應迅速與 ApoH 磁珠接觸。
樣本體積可按比例放大或縮小。如果懷疑微生物滴度較低，可按比例放大樣本體積。對于體積超過 5 mL 的樣本，請聯(lián)系我們的技術支持。
受損的微生物可能會失去對 ApoH 蛋白或 ApoH 衍生的 Peps6 分子的親和力，因此：
優(yōu)先使用新鮮材料。
檢查冷凍樣本中細菌的活力。應避免樣本的反復凍融循環(huán)。
使用質量較差的起始材料會導致靈敏度降低。
九、使用說明
樣本在捕獲緩沖液中的稀釋
將樣本在捕獲緩沖液中稀釋，然后渦旋。樣本稀釋后緩沖液的最終濃度必須為 1X：
小體積樣本（1199 µL）：將 10X TTGB 緩沖液在無菌蒸餾水中稀釋至 1X 濃度。向樣本中加入足夠的 1X TTGB 緩沖液，使總體積達到 1 mL。
大體積樣本（0.25.0 mL）：將 10X TTGB 緩沖液在無菌蒸餾水中稀釋至 2X 濃度。將 1 體積的 2X TTGB 緩沖液加入 1 體積的樣本中。
捕獲
使用前，通過輕輕吸液或手動倒置小瓶底重懸 ApoH 磁珠（請勿渦旋）。
每個樣本添加 20 µL ApoH 磁珠。
輕輕混勻（請勿渦旋）。
在 3537°C 下適當攪拌孵育 30 分鐘：試管應保持直立并劇烈攪拌，以使 ApoH 磁珠保持懸浮狀態(tài)。例如，將 Thermomixer 設置為 1000 rpm。
將反應管置于磁鐵上，直至所有 ApoH 磁珠側向沉淀且上清液變澄清。
丟棄上清液，不要擾動 ApoH 磁珠沉淀。此時細菌已濃縮在沉淀中。
洗滌（可選）
純培養(yǎng)物、血漿或血清無需洗滌。全血等復雜樣本可能需要洗滌：
在磁鐵上的磁珠沉淀上輕輕加入 1 mL PBS（不含\(Ca^/Mg^\)）。不要懸浮磁珠。
丟棄上清液，不要擾動 ApoH 磁珠沉淀。
如有需要，重復洗滌步驟一次。
十、細菌檢測
結合的細菌可使用您的標準方案直接在 ApoH 磁珠上進行檢測，必要時可進行調整。注意：對于小體積樣本，在添加重懸液之前對磁珠沉淀進行短時間離心。
培養(yǎng)：將 ApoH 磁珠重懸于適當?shù)呐囵B(yǎng)基中。直接將懸浮液接種到培養(yǎng)皿中。在細菌的最適溫度下孵育。
PCR：將 ApoH 磁珠重懸于您的裂解緩沖液中。劇烈渦旋 15 秒以破壞磁珠沉淀。裂解步驟后，通過磁鐵或在 10,000 g 下離心 1 分鐘去除 ApoH 磁珠。將上清液轉移到新管中。按照您常用的 DNA 提取和 PCR 方案進行操作。
顯微鏡觀察：將 ApoH 磁珠重懸于 PBS 或您的特定培養(yǎng)基中。磁珠無自發(fā)熒光，可用于熒光應用。
其他：將 ApoH 磁珠重懸于適合其他應用的適當溶液中。有關其他特定應用，請聯(lián)系我們的技術支持。
十一、故障排除
以下提供一些指導原則。如有任何剩余問題、需要進一步信息或需要針對您的特定應用定制方案，請聯(lián)系我們的技術支持
磁珠和緩沖液的處理
在無菌環(huán)境中打開 ApoH 磁珠小瓶：污染會降低穩(wěn)定性并影響效率。
始終將 ApoH 磁珠添加到樣本中，而不是相反。
使用無菌蒸餾水進行緩沖液稀釋。檢查樣本中混合后的 TTGB 緩沖液確實為 1X 濃度。
檢查 TTGB 緩沖液是否未被污染。
根據(jù)微生物或樣本的不同，捕獲緩沖液的選擇和用量可能需要優(yōu)化。
大體積樣本
大體積樣本（5100 mL）需要比試劑盒中包含的更多磁珠和緩沖液。它們可以單獨購買。
樣本在捕獲緩沖液中的稀釋：將 2X 或 10X 濃縮的 TTGB 緩沖液直接添加到樣本中，以達到 1X 最終緩沖液濃度。
每個樣本添加 20 µL ApoH 磁珠，除非樣本超過 10 mL。如果是這樣，可能需要增加磁珠體積。
超過 20 mL 的樣本可以通過軌道攪拌（將輪子設置為 3 rpm）代替 1000 rpm 的直立攪拌進行攪拌。
大體積樣本需要時間達到合適的溫度。在添加磁珠之前，讓樣本達到室溫或孵育溫度。
孵育
遵守孵育的溫度和時間，以確保獲得最佳結果。
選擇足夠大的試管以確保正確攪拌，例如：使用 1.5 mL 試管進行 1 mL 反應。
試管應保持直立（小試管和中試管）并劇烈攪拌，以使磁珠保持懸浮狀態(tài)。例如，將 Thermomixer 設置為 1000 rpm。
僅使用玻璃或聚丙烯塑料管，避免使用聚苯乙烯。
磁化
如果上清液中仍有一些磁珠或磁珠沉淀被吸頭破壞，增加磁化時間。通常，此步驟的時間范圍為 2 分鐘（對于細胞培養(yǎng)）至 15 分鐘（對于全血）。
使用高能量釹磁鐵（812 kg 吸引力），以確保磁珠全磁化。低磁力磁鐵會導致磁珠和微生物損失。太強的磁鐵可能會將磁珠嵌入塑料管中。
在吸出上清液之前，去除漂浮的氣泡。
不要讓磁珠磁化超過 30 分鐘。微生物的完整性可能會受到損害。
洗滌
細胞上清液、血漿或血清無需洗滌，除非檢測系統(tǒng)非常敏感。全血等復雜樣本可能需要對磁珠沉淀進行 2 次洗滌。在磁鐵上洗滌。切勿在洗滌溶液中渦旋磁珠。
PBS 可以用另一種洗滌緩沖液代替。聯(lián)系我們的技術支持以檢查其與該程序的兼容性。
檢測
一些細菌物種在捕獲后無法生長。這些細菌處于有活力但不可培養(yǎng)的狀態(tài)。通過顯微鏡或 PCR 檢查捕獲情況。
在適用的情況下，裂解步驟對于成功檢測微生物至關重要。裂解緩沖液的效率在很大程度上取決于化學配方，并且可能因供應商而異。如果可能，添加裂解對照以檢查效率。不要猶豫在裂解緩沖液中劇烈渦旋 ApoH 磁珠。
如果需要進行光密度測量，請用磁鐵去除磁珠，僅測試上清液。磁珠呈深棕色，會極大地干擾光學測量。
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