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    PUREfrex 刷新了重組無細胞蛋白質合成

    發布時間: 2021-06-23  點擊次數: 1475次

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    PUREfrex 刷新了重組無細胞蛋白質合成。

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    關于 PURE frex ®

    它不是裂解物。PURE frex ® 是*的基于大腸桿菌成分的重組蛋白質合成技術。你需要的一切。沒有你不知道的。將 PURE frex ®試劑盒視為您的個人臺式蛋白質合成機。快速、方便且具有成本效益的應用程序僅受您的想象力限制。在短短幾個小時內每毫升產生數百微克。

    PURE frex概述

     

    PUREfrex®是一種超酷、超智能、超有用的體外偶聯轉錄/翻譯系統,基于大腸桿菌翻譯機制,但與 S30 翻譯提取物*不同。PUREfrex® 不是提取物。PUREfrex® 是一種重組系統,包含高度純化的大腸桿菌核糖體、高度純化的重組蛋白以及轉錄、翻譯、氨酰化和能量再生所需的其他高度純化因子。因此,與基于細胞提取物的系統相比,PUREfrex 試劑盒提供了以前難以想象的反應可控性,以及用于純化合成蛋白質的明確定義的分子組分混合物。

    您可以使用 PURE frex做一些事情。

     

    產生原核蛋白質

    產生真核蛋白質

    產生膜蛋白

    產生細胞毒性蛋白。

    產生二硫鍵蛋白

    確認開放閱讀框

    評估突變對 ORF 的影響

    評估氨基酸取代對蛋白質活性的影響

    生產標記蛋白

    通過非天然氨基酸為蛋白質添加官能團。

    為功能域或表位作圖生成截短的蛋白質

    核糖體展示

    翻譯機制研究

    合成生物學

    蛋白質折疊研究

    體外區室化

    超高純度的 PUREfrex 成分可將核酸酶和蛋白酶活性降至很低

    PUREfrex 試劑盒成分經過超高純化,可去除污染的核酸酶和蛋白酶。嚴格去除核酸酶和蛋白酶活性以保持 DNA(或 RNA)模板的完整性并保持 PUREfrex 反應蛋白的功能,從而最大限度地獲得完整的目標蛋白。此外,使用 PUREfrex 2.0 2.1 試劑盒,RNase ß-半乳糖苷酶的污染大大減少,脂多糖 (LPS) 也減少到每 1 µL 反應混合物約 0.1 EU

     

    PUREfrex 套件經過格式化,易于操作。適合高通量操作的一步協議。

     

    基礎 Purefrex 套件僅包含 4 個小瓶。溶液 I 包含所有非蛋白質成分,溶液 II 包含所有蛋白質成分,溶液 III 包含核糖體。第四個小瓶包含用于執行陽性對照反應的即用型 DNA 模板。要使用 Purefrex 生產蛋白質,只需將您的模板與溶液 III III 混合并孵育。

     

    可以通過 PCR 輕松制備合適的模板。主要要求包括 T7 啟動子、核糖體結合位點(Shine-Delgarno 序列)和終止密碼子。

    有關模板準備的詳細信息和提示,請單擊此頁面導航側欄中的鏈接。

     

    PUREfrex 蛋白質組分未標記。

     

    如最初所述,所有 PURE 系統蛋白質組分都帶有 HIS 標簽,以幫助純化目標蛋白質。因此,在通過離心或過濾去除核糖體后,通過將反應混合物通過金屬離子親和色譜柱,可以通過負選擇從 PURE 反應組分中快速純化目標蛋白質。在 PUREfrex 系統中,蛋白質組分沒有被標記,不會對標記的翻譯蛋白組分對蛋白質合成的影響留下任何疑問,并且使用戶能夠通過模板設計生產帶有任何所需標簽或根本沒有標簽的目標蛋白質。 

     

    PURE frex基于 PURE 技術。

    PUREfrex Gene Frontier 2011 年推出,作為東京大學 Takuy??a Ueda 教授開發的開創性 PURE 系統技術(使用重組元件的蛋白質)的商業改編(參考文獻 12)。PURE 技術由轉錄、翻譯、氨酰化和能量再生因子組成。所有蛋白質因子和核糖體都與底物組裝在一起,包括緩沖液中的氨基酸、NTP tRNA(見下圖)。

     

     

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