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兔多克隆抗體一般制備流程與反應原理分析

發布時間： 2020-08-13　　點擊次數： 1631次

　　抗體的主要功能是與抗原(包括外來的和自身的)相結合，從而有效地清除侵入機體內的微生物、寄生蟲等異物，抗體(antibody)是一種應答抗原產生的、可與抗原特異性結合的蛋白質。每種抗體與特定的抗原決定基結合。這種結合可以使抗原失活，也可能無效但有時也會對機體造成病理性損害，如抗核抗體、抗雙鏈DNA抗體、抗甲狀腺球蛋白抗體等一些自身抗體的產生，對人體可造成危害。

　　兔多克隆抗體用PUMA作為抗原刺激兔機體，產生免疫學反應，由機體的漿細胞合成并分泌的與抗原有特異性結合能力的一組免疫球蛋白。PUMA Rabbit Polyclonal Antibody是通過分子生物學方法構建了重組PUMA的表達載體,并誘導實現PUMA抗體的大量表達。該重組蛋白以可溶性形式存在,經親和柱純化后對家兔進行免疫,得到PUMA抗體(兔多抗)。

　　PUMA刺激機體，產生免疫學反應，由機體的漿細胞合成并分泌的與抗原有特異性結合能力的一組免疫球蛋白，這種與抗原有特異性結合能力的免疫球蛋白就是抗體。一般而言，抗體按靶位點不同主要分為單克隆抗體和多克隆抗體，由多個B淋巴細胞克隆產生的，受到多種抗原決定簇刺激并可以與多種抗原表位結合的抗體就是多克隆抗體。

　　兔多克隆抗體一般制備流程：*抗原的準備→兔子的免疫→效價檢測和終放→抗體親和純化→抗體的濃縮和保存。PUMA的表達受腫瘤抑制基因p53的調節。PUMA參與由多種信號誘導的p53依賴性和非依賴性細胞凋亡，并且受轉錄因子調節，而不是通過翻譯后修飾。活化后，用PUMA抗凋亡相互作用的Bcl-2家族成員，從而釋放Bax蛋白和/或Bak的其然后能夠發送信號的細胞凋亡的線粒體。繼線粒體功能障礙時，胱天蛋白酶級聯被激活，終導致細胞死亡。

　　生化研究表明PUMA與抗凋亡Bcl-2家族成員如Bcl-xL，Bcl-2，Mcl-1，Bcl-w和A1相互作用，抑制它們與促凋亡分子Bax和Bak的相互作用。當它們的抑制被解除時，它們導致Bax的易位和線粒體功能障礙的激活，導致線粒體凋亡蛋白細胞色素c，SMAC和凋亡誘導因子(AIF)的釋放，導致胱天蛋白酶活化和細胞死亡。因為PUMA對結合Bcl-2家族成員具有高親和力，另一個假設是PUMA直接激活Bax和/或Bak，并且通過Bax多聚化觸發線粒體易位并且其誘導細胞凋亡。然而，各種研究表明，PUMA不依賴于與Bax/Bak的直接相互作用來誘導細胞凋亡。

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